详细介绍
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
腔阔盘吸虫PCR检测试剂盒规格 | Eurytrema coelomaticumPCR | BK-P9155 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
小鼠艾氏腹水细胞英文名称:EAC
50%卵黄水/50%卵黄/50% Egg-Yolk Solution卵黄钠琼脂或卵黄琼脂或甘露醇卵黄多粘菌素琼脂的配套试剂50毫升国产/进口
粉拟青霉 Paecilomyces farinosus酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
人脐静脉血管内皮细胞CCD-1095Sk(人腺浸润性导管旁皮肤细胞)
低氧诱导因子1α(HIF1α)重组蛋白英文名称:Recombinant Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha (HIF1a)
羊胆/Bile salt from sheepBR25克国产/进口
EC肉汤/大肠杆菌检验肉汤/E.Coli Broth粪大肠菌群、大肠杆菌的检验250克国产/进口
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae人脐静脉内皮细胞*培养基
Lysozyme Antibody/溶菌酶100mg国产
中慢生华癸瘤菌 Mesorhizobium huakuiiU251人胶质瘤细胞
G蛋白偶联受体家族C5组成员A(GPRC5A)重组蛋白英文名称:Recombinant G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A (GPRC5A)
腔阔盘吸虫PCR检测试剂盒规格3,5-二溴吡 236.89 3,5- dibromopyridine*:625-92-3分子量: C5H3Br2N
2,6-二氯-3-吡 173 2,6- two -3- chlorine cyanopyridines*:40381-90-6分子量: C6H2Cl2N2
4-氯-3-三氟甲 306.45 4- -3- three f*:672-57-1分子量: C7H3ClF3I
6-氯-5-氟甲酸吡 175.54 6- chloride -5-*:860296-24-8分子量: C6H3ClFNO2
1--3-三氟甲-5-氯-1H-吡唑 246.6162496 1- 3 -三氟甲- 5 -氯- 1吡唑*:1076197-51-7分子量: C10H6ClF3N2
2-丁-3-(4-羟甲酰)并呋 294.34 2- butyl -3- (4- hydroxy group) benzene and the benzene*:52490-15-0分子量: C19H18O3
2,6-二羟甲 124.14 2,6- two hydroxy toluene*:608-25-3分子量: C7H8O2
4,4'-二(4-吡)联 308.38 4,4'- two (4-)*:319430-87-0分子量: C22H16N2
2--4-氯-6-(三氟甲)嘧 197.55 2- amino -4- -6- (three f)*:16097-60-2分子量: C5H3ClF3N3
2-环己胺乙磺 2- cyclic amino sulfonic acid 207.3分子量: C8H17NO3S*:103-47-9
日落黄 Sunset yellow 452.37分子量: C16H10N2Na2O7S2*:2783-94-0
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