详细介绍
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
亨德拉病毒PCR检测试剂盒价格 | Hendra VirusRTPCR | BK-P9250 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
油酸甲酯 CAS * 规格: 1ml
睾(T) CAS * 规格: 3支/套,0.5ml/支
他胺 CAS 13311-84-7 * 规格: 100mg
紫丁香苷 CAS 118-34-3 * 规格: 20mg
百蕊草 CAS * 规格: 3g
二甲酰胺 CAS * 规格: 1ml
大叶紫珠 CAS * 规格: 10g
3,5-二氨基-6-吡嗪-2-羧酸甲酯 CAS * 规格: 50mg
粉萆薢 CAS * 规格: 0.5g
富马酸福莫特罗 CAS 43229-80-7 * 规格: 100mg
普罗布考 CAS * 规格: 50mg
γ-氨酪酸 CAS * 规格: 20mg/支
咪普利 CAS * 规格: 100mg
门冬酰胺酶(大肠) CAS * 规格: 5mg/支
尿囊素 CAS 97-59-6 * 规格: 50mg
亨德拉病毒PCR检测试剂盒价格1,1-二甲 60.1 1,1- two methyl hydrazine*:57-14-7分子量: C2H8N2
1,3-二氯-2- 272.9 1,3- two -2- chlorine 4-iodo*:19230-28-5分子量: C6H3Cl2I
4--3-吡 220.01 4- amino -3-*:88511-27-7分子量: C5H5IN2
5-硝-8-羟喹啉 190.16 5- nitro -8- hydroxy group*:4008-48-4分子量: C9H6N2O3
4-吡 104.11 4- cyanopyridine*:100-48-1分子量: C6H4N2
3-(3-溴)吡唑 223.07 3- (3-)*:149739-65-1分子量: C9H7BrN2
细辛醛 Asarylaldehyde 196.19988分子量:C10H12O4*:14374-62-0
伏杀 Volt kill 367.81分子量: C12H15ClNO4PS2*:2310-17-0
石菖蒲提取物 Shi Changpu extract 分子量:*:
尿嘧 112.09 Uracil*:66-22-8分子量: C4H4N2O2
1-甲氧-2-(环氧甲氧) 180.2 1- a -2- (epoxy group) benzene*:2210-74-4分子量: C10H12O3
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