肠道病毒通用PCR检测试剂盒厂家

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

田菁瘤菌 Azorhizobium canlinodans瘤菌 Rhizobium sp.

干扰素α(IFNα)重组蛋白英文名称：Recombinant Interferon Alpha (IFNa)

人肺大动脉平滑肌细胞*培养基100mL

HGC-27人胃细胞

臭曲霉 Aspergillus foetidus人脐静脉内皮细胞*培养基

中慢生华癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii黄曲霉 Aspergillus flavus

优级胎牛血清/Fetal bovine serum(Characterized FBS)BR100/500毫升国产/进口

无花果曲霉 Aspergillus ficuumM1(小鼠白血病细胞)

免疫球蛋白G1(IgG1)天然蛋白 英文名称：Native Immunoglobulin G1 (IgG1)

哥伦比亚血琼脂基础/Columbia Blood Agar Base各种细菌的基础培养基250克国产/进口

凝结芽孢杆菌 Bacillus coagulans

肠道病毒通用PCR检测试剂盒厂家NCI-H460(人肺细胞)5×106cells/瓶×2

N-myc下游调节基因2(NDRG2)重组蛋白  Recombinant N-myc Downstream Regulated Gene 2 (NDRG2)

多巴胺受体D3(DRD3)重组蛋白  Recombinant Dopamine Receptor D3 (DRD3)

解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)重组蛋白  Recombinant A Disintegrin And Metalloprotease 10 (ADAM10)

特异性蛋白1(Sp1)重组蛋白  Recombinant Specificity Protein 1 (Sp1)

组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)重组蛋白  Recombinant Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 3 (TIMP3)

OP9(小鼠骨髓基质细胞)5×106cells/瓶×2

HLF-a(人肺细胞)5×106cells/瓶×2

人肺腺细胞  H1299

猫肾细胞  F81

亚利桑那菌琼脂/SA琼脂/Salmonella Arizona Agar亚利桑那沙门氏菌的选择性分离250克国产/进口

锰营养琼脂培养基/Manganese Nutrient Agar Medium250克国产/进口

胆硫琼脂/胆盐硫琼脂培养基/DHL琼脂/DHL Agar沙门氏菌和志贺氏菌的分离培养250克国产/进口

Hanks’平衡盐/Hanks’ Balanced Salt solution细胞培养级500毫升国产/进口

人肾动脉平滑肌细胞*培养基100mL

大鼠小梁网细胞*培养基100mL

技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。