详细介绍
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
啮蚀艾肯菌PCR检测试剂盒规格 | Eikenella corrodensPCR | BK-P9099 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
香 CAS 91-64-5 * 规格: 20mg
乙酰碱 CAS 77181-26-1? * 规格: 20mg
桉油精 CAS * 规格: 20mg
熊果酸 CAS 77-52-1 * 规格: HPLC≥98%,20mg/vial
地索苷 CAS 14144-06-0 * 规格: HPLC≥98%,20mg/vial
钩藤碱 CAS 76-66-4 * 规格: HPLC≥98%,20mg/vial
青阳参甙元 CAS 84745-94-8 * 规格: HPLC≥98%,20mg/vial
洋川芎内酯H CAS 94596-27-7 * 规格: HPLC≥98%,20mg/vial
beta-胡萝卜素 CAS 7235-40-7 * 规格: HPLC≥90%,20mg/vial
酸枣仁皂苷 A CAS 55466-04-1 * 规格: HPLC≥98%;20mg/vial
地肤子皂苷ⅠC CAS 96990-18-0 * 规格: HPLC≥98%;20mg/vial
水仙苷 CAS 604-80-8 * 规格: HPLC≥98%;20mg/vial
3-正基苯酞 CAS 551-08-6 * 规格: HPLC≥98%,20mg/vial
蒿甲 CAS 71963-77-4 * 规格: HPLC≥98%,20mg/vial
2-(3,4二羟基苯基)-5,7-二羟基 CAS 22688-79-5 * 规格: 5mg
啮蚀艾肯菌PCR检测试剂盒规格甲酸钴 301.16 Cobalt benzoate*:932-69-4分子量: C14H10CoO4
2-溴-6-氯吡 192.44 2- -6- chloride*:5140-72-7分子量: C5H3BrClN
性玫瑰红B Acid rose red B 580.65分子量: C27H29N2NaO7S2*:3520-42-1
2--5-硝三氟甲 206.12 2- amino -5- nitro three f*:121-01-7分子量: C7H5F3N2O2;O2NC6H
4-己溴 241.17 4- hexyl bromobenzene*:23703-22-2分子量: C12H17Br
5--1,2,3-噻二唑 101.13 5- -1,2,3- two*:4100-41-8分子量: C2H3N3S
酸铝 294.19 Lactic acid aluminum*:18917-91-4分子量: C9H15AlO9
2-乙酰-5-溴吡 215.05 2- acetyl -5-*:7169-97-3分子量: C7H7BrN2O
间溴联 233.1 Inter - Br*:2113-57-7分子量: C12H9Br;C6H5C6H4Br
依诺沙星 Enoxacin 320.32分子量: C15H17FN4O3*:74011-58-8
异戊乙净 ISO e 255.38分子量: C11H21N5S*:22936-75-0
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
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