刺激隐核虫PCR检测试剂盒说明书

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。

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δ-促睡眠肽(δSIP)重组蛋白英文名称：Recombinant Delta-Sleep Inducing Peptide (dSIP)

HA(人羊膜细胞)5×106cells/瓶×2

BC3H1(小鼠脑瘤细胞)5×106cells/瓶×2

酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae人神经胶质细胞瘤

PC-3M-IE8(人前列腺高转移细胞株)大鼠肾小球内皮细胞*培养基

厚垣孢普可尼亚菌 Pochonia chlamydosporia异型德克酵母 Dekkera anomala

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人脑静脉血管平滑肌细胞*培养基100mL

刺激隐核虫PCR检测试剂盒说明书中国台湾根霉 Rhizopus formosensis青春双歧杆菌 Bifidobacterium adolensentis

苜蓿中华根瘤菌 Sinorhizobium meliloti黑曲霉 Aspergillus niger

人羊膜细胞大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

人脐带单核细胞*培养基PANC-1(人胰腺细胞)

酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae杆菌属 Lactobacillus sp.

泾阳链霉菌 Streptomyces jingyangensis菜豆根瘤菌 Rhizobium phaseoli

Psi2 DAP(小鼠胚胎成纤维细胞)THP-1人单核白血病细胞

植物杆菌 Lactobacillus plantarum酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp. lactis

苜蓿中华根瘤菌 Sinorhizobium meliloti猴菌

NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis

嗜酸杆菌 Lactobacillus acidophilusFaDu(人咽鳞细胞)

大豆慢生根瘤菌酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp. lactis

人结肠细胞苜蓿中华根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeRSC96(大鼠雪旺细胞)

鬼伞属 Bradyrhizobium vigna宇佐美曲霉 Aspergillus usamii

苏云金芽胞杆菌库尔斯塔克亚种 Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki双孢蘑菇