详细介绍
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
疏螺旋体PCR检测试剂盒规格 | Borrelia afzelii PCR | BK-P8895 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
嘧螨酯;纯品型;标准品;有证书 CAS 229977-93-9 * 规格: 0.1g
S-戊;纯品型;标准品;有证书 CAS 66230-04-4 * 规格: 0.1g
喹磷;纯品型;标准品;有证书 CAS * 规格: 0.25g
戊;纯品型;标准品;有证书 CAS 51630-58-1 * 规格: 0.25g
恩诺星-对照品;有报告 CAS 93106-60-6 * 规格: 50mg
乳糖;纯品型;标准品;有证书 CAS 63-42-3 * 规格: 1g
苯甲醇;纯品型;标准品;有证书 CAS 100-51-6 * 规格: 100mg
齐墩果酸,3-氧代-12-烯-28-齐 CAS * 规格: HPLC≥98%;20mg
管花苷A CAS 112516-05-9 * 规格: HPLC≥98%;20mg
对羟基苯 CAS 501-97-3 * 规格: HPLC≥98%;20mg
去甲二氢愈创木酸 CAS 500-38-9 * 规格: HPLC≥98%;20mg
苏碱 CAS 471-87-4 * 规格: HPLC≥98%;20mg
紫苏醇 CAS 536-59-4 * 规格: HPLC≥98%;20mg
乙氧基血根碱 CAS 28342-31-6 * 规格: HPLC≥98%;20mg
8-香叶草氧基补骨脂素 CAS 7437-55-0 * 规格: HPLC≥98%;20mg
疏螺旋体PCR检测试剂盒规格牡荆素葡萄糖苷 Vitexin glucoside 594.52分子量:C27H30O15*:76135-82-5
锌试剂 Zinc reagent 440.43分子量: C20H16N4O6S*:135-52-4
拟人参皂苷RT5 Human RT5 654.88228分子量:C36H62O10*:98474-78-3
1,3,5-三[(3-吡)-3-] 1,3,5- three [(3-) -3- phenyl] benzene*:921205-03-0分子量:
对氯三氟甲 180.6 To three f*:98-56-6分子量: C7H4ClF3
溴灵 Bromine rat 523.42分子量: C31H23BrO3*:56073-10-0
2,4-二氯-3,5-二硝三氟甲 305 2,4- two -3,5- two nitro three f*:29091-09-6分子量: C7HCl2F3N2O4
3-溴-6-羟-5-硝吡 218.99 3- -6- hydroxy -5- nitro pyridine*:15862-34-7分子量: C5H3BrN2O3
3,3,5,5-四甲-1-吡咯啉N-氧物 141.21 3,3,5,5- four -1- N-*:10135-38-3分子量: C8H15NO
3-硝邻二甲 151.16 3- nitro ortho xylene*:83-41-0分子量: C8H9NO2
去甲氧姜黄素 Go to a 338.35392分子量:C20H18O5*:33171-16-3
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
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